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Fiche de revision sur Milieux de culture et géloses

Appartient au cours : Milieux de culture et géloses

Fiches de révision : Les milieux de culture

Sommaire

  • Fiche 1 : Milieux d'isolement non sélectifs (usuels)
  • Fiche 2 : Milieux sélectifs et différentiels des bacilles Gram négatifs
  • Fiche 3 : Milieux sélectifs et différentiels des cocci Gram positifs
  • Fiche 4 : Géloses pour identification spécifique
  • Fiche 5 : Géloses d’application technique

Fiche 1 : Milieux d'isolement non sélectifs (usuels)

Objectif : Savoir décrire le rôle et les caractéristiques des géloses nutritive et au sang, ainsi que les types d’hémolyse.

🎯 Points essentiels

  • Les milieux non sélectifs permettent la croissance de la majorité des bactéries sans inhibition.
  • Gélose nutritive : milieu simple de base pour bactéries non exigeantes.
  • Gélose au sang : permet la culture de germes exigeants et l’observation de l’hémolyse.

📚 Définitions / Notions clés

  • Bactéries non exigeantes : se développent sur un milieu simple (ex : E. coli).
  • Bactéries exigeantes : nécessitent des facteurs de croissance supplémentaires (ex : Streptococcus, Haemophilus).
  • Hémolyse : lyse des globules rouges autour d’une colonie.
    • α (alpha) : hémolyse partielle, verdâtre.
    • β (bêta) : hémolyse totale, zone claire.
    • γ (gamma) : pas d’hémolyse.

⚙️ Mécanisme / Méthode

  • Gélose au sang : on peut utiliser sang frais (hémolyse visible) ou sang cuit (gélose chocolat, libère les facteurs X et V pour Haemophilus).
  • Lecture : après incubation, observer la zone autour des colonies.

🧪 Exemple

  • Streptococcus pyogenes donne une hémolyse β (zone claire nette) sur gélose au sang frais.
  • Haemophilus influenzae pousse sur gélose chocolat (nécessite facteurs X et V).

⚠️ Pièges / Erreurs fréquentes

  • Confondre hémolyse β et γ : vérifier la transparence totale.
  • La gélose chocolat n’est pas du chocolat, mais du sang chauffé.
  • Ne pas utiliser de gélose au sang pour des germes non exigeants (perte de spécificité).

🔗 Liens avec d’autres notions

  • Gélose au sang utilisée aussi pour antibiogramme de certains germes.
  • Les milieux sélectifs (fiches suivantes) inhibent une partie des bactéries.

❓ Auto-test

  • Quels sont les trois types d’hémolyse et leurs aspects ?
  • Pourquoi la gélose chocolat est-elle dite « cuite » ?
  • Citez un exemple de bactérie exigeante et le milieu adapté.

✅ Réponses

  • α = verdâtre, β = clair, γ = aucun changement.
  • Le sang est chauffé pour libérer les facteurs X et V.
  • Haemophilus influenzae → gélose chocolat.

Fiche 2 : Milieux sélectifs et différentiels des bacilles Gram négatifs

Objectif : Savoir décrire et différencier les géloses Drigalski, MacConkey, Hektoen pour l’isolement des entérobactéries.

🎯 Points essentiels

  • Ces milieux contiennent des inhibiteurs des Gram positifs (sels biliaires, colorants).
  • Ils sont différentiels grâce à un sucre (lactose) et un indicateur de pH.
  • Permettent l’identification présomptive des entérobactéries.

📚 Définitions / Notions clés

  • Gélose Drigalski : bleu de bromothymol → colonies lactose+ jaunes, lactose– bleues/vertes.
  • Gélose MacConkey : rouge neutre → colonies lactose+ roses/rouges, lactose– incolores.
  • Gélose Hektoen : recherche de Salmonella et Shigella ; détection fermentation sucres et production H₂S (colonies à centre noir).

⚙️ Mécanisme / Méthode

  • Drigalski et MacConkey : le lactose fermenté produit des acides qui font virer l’indicateur.
  • Hektoen : contient lactose, saccharose et thiosulfate. H₂S + fer → précipité noir.

🧪 Exemple

  • E. coli : lactose+ → colonies jaunes (Drigalski) ou roses (MacConkey).
  • Salmonella : lactose–, H₂S+ → colonies incolores à centre noir (Hektoen).

⚠️ Pièges / Erreurs fréquentes

  • Drigalski et MacConkey sont similaires mais indicateurs différents.
  • Hektoen ne différencie pas bien les lactose– non H₂S (ex : Shigella colonies incolores sans noir).
  • Ne pas confondre Drigalski (bleu de bromothymol) et MacConkey (rouge neutre).

🔗 Liens avec d’autres notions

  • Milieux d’orientation pour coprocultures.
  • Différenciation des entérobactéries lactose+/lactose–.

❓ Auto-test

  • Quelle est la couleur des colonies lactose+ sur Drigalski ?
  • Sur Hektoen, que signifie un centre noir ?
  • Citez deux inhibiteurs des Gram+ dans MacConkey.

✅ Réponses

  • Jaunes.
  • Production de H₂S.
  • Sels biliaires et violet de cristal.

Fiche 3 : Milieux sélectifs et différentiels des cocci Gram positifs

Objectif : Savoir décrire Chapman et Baird-Parker pour l’isolement des staphylocoques et la distinction de S. aureus.

🎯 Points essentiels

  • Chapman : forte concentration en NaCl (75 g/L) → sélection des staphylocoques halophiles.
  • Baird-Parker : plus spécifique pour S. aureus avec tellurite et lécithine.
  • Différenciation par le mannitol (Chapman) ou la lécithinase (Baird-Parker).

📚 Définitions / Notions clés

  • Halophile : tolère les fortes concentrations en sel.
  • Fermentation du mannitol → acidification → virage au jaune (Chapman).
  • Réduction du tellurite → colonies noires (Baird-Parker).
  • Lécithinase → halo clair autour de la colonie (Baird-Parker).

⚙️ Mécanisme / Méthode

  • Chapman : mannitol + rouge de phénol. Si mannitol + → acide → jaune.
  • Baird-Parker : gélose contenant tellurite de potassium et jaune d’œuf (lécithine).
    • S. aureus réduit le tellurite (noir) et hydrolyse la lécithine (halo).

🧪 Exemple

  • Staphylococcus aureus : colonies jaunes sur Chapman, noires avec halo sur Baird-Parker.
  • Staphylococcus epidermidis : colonies roses sur Chapman, noires sans halo (ou absence de croissance).

⚠️ Pièges / Erreurs fréquentes

  • Tous les staphylocoques poussent sur Chapman → ne pas conclure S. aureus sans mannitol +.
  • Baird-Parker : certains S. aureus peuvent ne pas donner d’halo (faux négatif).
  • Chapman ne différencie pas les staphylocoques à coagulase négative entre eux.

🔗 Liens avec d’autres notions

  • Identification de S. aureus : confirmer par coagulase et DNase.
  • Milieux sélectifs Gram+ autres : gélose au sang pour streptocoques.

❓ Auto-test

  • Pourquoi la gélose Chapman est-elle sélective des staphylocoques ?
  • Quels sont les deux caractères observés sur Baird-Parker pour S. aureus ?
  • Quelle est la couleur d’une colonie de S. aureus sur Chapman ?

✅ Réponses

  • Forte teneur en sel (75 g/L) inhibe la plupart des autres bactéries.
  • Colonies noires (tellurite réduit) et halo clair (lécithinase).
  • Jaune (fermentation du mannitol).

Fiche 4 : Géloses pour identification spécifique

Objectif : Connaître le principe des géloses CLED et chromogènes pour l’orientation rapide.

🎯 Points essentiels

  • CLED : milieu pour ECBU ; empêche l’envahissement par Proteus ; différentiel lactose.
  • Chromogènes : substrats enzymatiques incolores → coloration spécifique des colonies.
  • Identification directe sans tests supplémentaires.

📚 Définitions / Notions clés

  • CLED (Cystine Lactose Electrolyte Deficient) : faible électrolyte → pas de swarming de Proteus ; contient lactose et bleu de bromothymol.
  • Milieux chromogènes (UriSelect, ChromID) : substrats libérant un chromophore par enzyme bactérienne.

⚙️ Mécanisme / Méthode

  • CLED : lecture comme MacConkey (lactose+ jaunes, lactose– vertes).
  • Chromogène : la colonie prend la couleur correspondant à l’enzyme.
    • Exemple : E. coli → β-glucuronidase → rose ; Enterococcus → β-glucosidase → bleu.

🧪 Exemple

  • Sur UriSelect : E. coli rose, Proteus orange, Klebsiella bleu-vert.
  • Sur CLED : E. coli jaune, Pseudomonas vert (lactose–).

⚠️ Pièges / Erreurs fréquentes

  • Les géloses chromogènes peuvent donner des faux positifs si la flore est mixte.
  • CLED n’est pas sélectif, certaines bactéries Gram+ peuvent pousser.
  • La couleur sur chromogène dépend de l’incubation (respecter le temps).

🔗 Liens avec d’autres notions

  • Alternative aux milieux traditionnels (MacConkey pour urines).
  • Utilisation en bactériologie rapide.

❓ Auto-test

  • Quel est l’avantage du CLED par rapport à MacConkey pour les urines ?
  • Quel principe est à la base des géloses chromogènes ?
  • Citez une coloration typique d’E. coli sur chromogène.

✅ Réponses

  • Empêche le swarming de Proteus.
  • Substrat enzymatique libérant un chromophore.
  • Rose (β-glucuronidase).

Fiche 5 : Géloses d’application technique

Objectif : Connaître Mueller-Hinton pour antibiogramme et Sabouraud pour champignons.

🎯 Points essentiels

  • Mueller-Hinton (MH) : milieu standard pour antibiogramme par diffusion (disques).
  • Sabouraud : milieu sélectif pour levures et moisissures, additionné d’antibiotiques.
  • Respect des normes (épaisseur, pH, cation).

📚 Définitions / Notions clés

  • Antibiogramme par diffusion : disques imprégnés d’antibiotiques déposés sur MH ; mesure des diamètres d’inhibition.
  • Sabouraud : faible pH (5.6) et antibiotiques (chloramphénicol) → inhibe bactéries.
  • Milieu standard : composition précise recommandée par le CLSI/EUCAST.

⚙️ Mécanisme / Méthode

  • MH : milieu gérosé riche, pH 7.2-7.4, avec cations (Ca²⁺, Mg²⁺) ajustés.
  • Sabouraud : contient peptone, glucose, agar, chloramphénicol (ou gentamicine).

🧪 Exemple

  • Candida albicans : colonies crémeuses, blanches sur Sabouraud à 30°C.
  • E. coli : inhibé par le chloramphénicol (ne pousse pas sur Sabouraud).

⚠️ Pièges / Erreurs fréquentes

  • Utiliser une gélose MH trop épaisse → sous-estimation des diamètres.
  • Sabouraud sans antibiotiques → contamination bactérienne.
  • Ne pas incuber Sabouraud en atmosphère enrichie en CO₂ (favorise bactéries).

🔗 Liens avec d’autres notions

  • MH peut être supplémentée en sang pour germes exigeants (MH-F).
  • Sabouraud utilisé en mycologie médicale.

❓ Auto-test

  • Pourquoi Mueller-Hinton est-elle obligatoire pour l’antibiogramme ?
  • Quel agent est ajouté à Sabouraud pour inhiber les bactéries ?
  • Quel pH a le milieu Sabouraud ?

✅ Réponses

  • C’est le milieu standardisé pour la diffusion : reproductibilité.
  • Chloramphénicol (ou autre antibiotique).
  • Acidité (pH 5.6) défavorable aux bactéries.